鄧志華課題組報(bào)道異體肝星狀細(xì)胞誘導(dǎo)擴(kuò)增Treg細(xì)胞治療自身免疫性肝炎小鼠的實(shí)驗(yàn)研究
近日，山西醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院鄧志華課題組在Biochemical and Biophysical Research Communications在線發(fā)表了題為“Adoptive transfer of regulatory T cells stimulated by Allogeneic Hepatic Stellate Cells mitigates liver injury in mice with concanavalin A-induced autoimmune hepatitis”的研究論文。
自身免疫性肝炎（Autoimmune hepatitis，AIH）是一種免疫介導(dǎo)的肝病，發(fā)病機(jī)制涉及遺傳、環(huán)境等因素，最終肝臟免疫耐受被打破，引起肝臟自身免疫反應(yīng)，出現(xiàn)肝臟炎癥壞死，并可進(jìn)展為肝纖維化、肝硬化。自20世紀(jì)50年代首次應(yīng)用潑尼松（聯(lián)合應(yīng)用或不聯(lián)合硫唑嘌呤）治療以來，這一標(biāo)準(zhǔn)療法已保持?jǐn)?shù)十年不變，但停藥后病情極易復(fù)發(fā)甚至惡化。因此，研究新的治療策略控制AIH進(jìn)展具有重要臨床意義。
AIH患者體內(nèi)的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Regulatory T cells, Treg）數(shù)量減少、功能缺陷，在疾病活躍期更為明顯。Treg細(xì)胞是重要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，可以特異性抑制活化T細(xì)胞，且該抑制作用無MHC限制性，F(xiàn)oxP3是Treg細(xì)胞分化和發(fā)育的關(guān)鍵基因，有理由認(rèn)為過繼轉(zhuǎn)移Treg細(xì)胞治療AIH是替代或協(xié)同糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑的有效方法，如何有效擴(kuò)增Treg細(xì)胞并在體內(nèi)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能，是目前研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)。
鄧志華課題組查閱大量文獻(xiàn)資料，發(fā)現(xiàn)肝星狀細(xì)胞（HSC）在肝纖維化中發(fā)揮關(guān)鍵作用，此外近年研究還發(fā)現(xiàn)HSC具有免疫細(xì)胞特征，直接參與肝臟的免疫調(diào)控，但由于HSC是肝臟的非實(shí)質(zhì)細(xì)胞，數(shù)量極少，分離小鼠原代HSC非常困難，限制了其研究進(jìn)展。課題組經(jīng)過不斷摸索研究，運(yùn)用OptiPrep分離液結(jié)合原位手工灌注法分離到BALB/c小鼠高純度高得率的原代HSC，倒置熒光顯微鏡下觀察：新分離的HSC呈圓形，具有豐富的脂滴，在328nm波長的紫外光激發(fā)下自發(fā)藍(lán)綠色熒光，逐漸從圓形變?yōu)樗笮位蛐切危囵B(yǎng)7d后，伸出細(xì)長的偽足。原代HSC油紅O染色陽性，胞漿中的脂滴呈紅色，細(xì)胞核呈藍(lán)色，傳2代后免疫細(xì)胞化學(xué)染色HSC完全表達(dá)α-SMA和Desmin，自發(fā)活化。課題組進(jìn)一步將BALB/c來源的HSC與C57BL/6小鼠脾臟來源的Treg細(xì)胞共培養(yǎng)，觀察HSC對(duì)Treg的誘導(dǎo)作用，異體活化的HSC可在體外呈劑量依賴性、通過細(xì)胞-細(xì)胞直接接觸方式誘導(dǎo)Treg增殖，擴(kuò)增的Treg可有效表達(dá)FoxP3，在體外可有效抑制Teff細(xì)胞增殖。為進(jìn)一步證實(shí)擴(kuò)增的Treg的免疫調(diào)節(jié)活性，將擴(kuò)增的Treg通過尾靜脈注射到ConA誘導(dǎo)的AIH小鼠體內(nèi)，觀察其對(duì)AIH小鼠受損肝臟的影響，發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增的Treg可調(diào)節(jié)AIH小鼠脾臟Treg/Th17比例失衡，肝臟炎癥和肝細(xì)胞壞死明顯減輕[圖2]，血清ALT、AST水平IL-6、TNFα、IFN-γ水平降低，發(fā)揮了良好的治療作用。該課題為尋找替代糖皮質(zhì)激素/硫唑嘌呤治療AIH的免疫細(xì)胞療法提供了可靠的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果。
圖1分離的原代肝星狀細(xì)胞倒置熒光顯微鏡下自發(fā)藍(lán)綠色熒光（A）和油紅染色（B）圖片
圖2過繼轉(zhuǎn)移體外擴(kuò)增的Treg細(xì)胞后AIH模型小鼠肝臟病理變化（A：正常肝臟B：AIH模型肝臟C：過繼轉(zhuǎn)移Treg后肝臟）
上述工作主要由山西醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院鄧志華課題組的博士研究生黃會(huì)芳（單位：山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院消化科）完成，鄧志華為通訊作者。
