（一）繁殖

目前繁殖裸鼠不用nu/nu雌鼠，因其繁殖性能低，一般采用雜合子交配方式或隱性純合子雄性與雜合子雌鼠交配。這種交配方法，其后代將出現(xiàn)表現(xiàn)型正常的仔鼠和裸鼠，比例為1:1。

繁殖時(shí)一般將nu基因?qū)隒57BL/10小鼠中。在把基因?qū)胪矗–ogenic）品系時(shí)，一般用雌性C57BL/10與雄性C57BL/10-nu（遠(yuǎn)交株）雜交。其交配方法和結(jié)果如下：

北京藥品檢定所繁殖裸鼠用的鼠種是BALB/C-nu/nu，系1973年從丹麥引入日本中央實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所研究。繼續(xù)培育三年后，交由日本CLEA株式會(huì)社進(jìn)行生產(chǎn)。1980年由CLEA引入。雄鼠是無(wú)胸腺裸鼠（BALB/C-nu/nu），雌鼠是有胸腺的雜合小鼠（BALB/C-nu/+）。采用BALB/C-nu/+♀與BALB/C-nu/nu♂隨機(jī)交配法進(jìn)行繁殖，已取得較好成果，裸鼠的生產(chǎn)性能良好：受胎率達(dá)81.5%，平均產(chǎn)仔率8.1只/窩，平均產(chǎn)裸仔率3.99只/窩，窩平均仔鼠成活3.62只，9周齡仔鼠成活率100%，其主要項(xiàng)目數(shù)據(jù)與日本中央實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所（CLEA）和英國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（LAC）發(fā)表的材料基本一致。

（二）飼料條件

因?yàn)槁闶笕狈細(xì)胞，易受細(xì)菌、病毒和霉菌感染的損害，如按常規(guī)動(dòng)物方式飼養(yǎng)，只有少數(shù)裸鼠能生存一個(gè)月以上，最多不超過(guò)四個(gè)月，而放在隔離器（Isolator）中飼料的可存活一年以上。因此，裸鼠的壽命與飼料的衛(wèi)生條件有密切的關(guān)系。一般是先在隔離器中繁殖。然后放入無(wú)特定病原體屏障環(huán)境中飼料。

無(wú)病原體條件的飼料需要在動(dòng)物和外界之間裝置一個(gè)屏障，屏障越嚴(yán)，飼料健康裸鼠就越有保證，然而，如不注意選擇屏障的類(lèi)型，它的效果就沒(méi)有保證，故應(yīng)持續(xù)檢查是否符合條件。

1．無(wú)病原條件飼料裸鼠設(shè)備

⑴帶有密封空氣過(guò)濾裝置的塑料籠。每一籠自為一個(gè)單元。它包括一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的透明塑料籠，籠蓋上覆有空氣過(guò)濾材料。后者與籠子的貼近處用膠帶纏繞數(shù)周予以密封。然后，此籠可置于一般實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)籠架上。過(guò)濾材料呈片狀，由疏紡的（但非紡織的）聚酯纖維制成。它應(yīng)該能夠防止微生物從籠外進(jìn)入籠內(nèi)。

全套籠具皆經(jīng)高壓蒸汽滅菌。使用它和喂養(yǎng)管理（如加飲水和飼料、清籠、斷奶等）時(shí)，都必須在一個(gè)防護(hù)罩內(nèi)進(jìn)行。罩內(nèi)所含有的是正壓過(guò)濾空氣。而且還是層流（無(wú)湍流的）、單向的。

上述的用具有操作方式是存養(yǎng)無(wú)致病原動(dòng)物最簡(jiǎn)單的方法。

⑵動(dòng)物隔離器。最常使用的此種器具有系由柔軟片狀的透明聚乙烯基塑料制成，但也可用有機(jī)玻璃、不銹鋼、鋁皮和尼龍等材料來(lái)作。市售成品有一定規(guī)格，也可專(zhuān)門(mén)根據(jù)需要來(lái)設(shè)計(jì)大小，這是一個(gè)無(wú)菌的生活小室，可排除任何微生物。室氣進(jìn)出該器都經(jīng)過(guò)濾。全部食品和用品都經(jīng)滅菌后，再經(jīng)一個(gè)無(wú)菌的入口小室送入器內(nèi)，可排除任何微生物。最初，選用化學(xué)滅菌劑和高壓蒸氣對(duì)該器進(jìn)行滅菌處理。

在無(wú)菌環(huán)境中，遺傳學(xué)背景相同的裸小鼠和通常的雜合子型小鼠壽命長(zhǎng)短相近。但是，Poiley氏等（1974）發(fā)現(xiàn)，在這種環(huán)境中，新生小鼠的存活率，較之在普遍環(huán)境中的為低。為了使它們胃腸道的功能更接近于正常，有人提議給無(wú)菌環(huán)境中的裸鼠接種一次非致病的細(xì)菌（Poliey氏等，1974；Eaton等，1975）。這樣，常?？梢云鸬礁倪M(jìn)生殖性能的作用，并有助于把無(wú)菌小鼠從隔離器中轉(zhuǎn)移到條件較差的存養(yǎng)設(shè)備中去。

為了最有效的控制環(huán)境，從而得以盡力保存無(wú)菌的（或帶有一定菌群）裸體小鼠，隔離器是理想的存養(yǎng)設(shè)備。但它也有缺點(diǎn)，這就是費(fèi)勞力，在一定空間中繁育動(dòng)物的數(shù)量有限。

⑶空氣層流器。它包括標(biāo)準(zhǔn)的小室，覆罩和網(wǎng)架。每套器具形成一個(gè)獨(dú)立的環(huán)境，與室內(nèi)通風(fēng)系統(tǒng)無(wú)關(guān)。它自己輸入過(guò)濾空氣，把超凈空氣完滿(mǎn)地注入鼠籠，并以柱狀排出。由于每套器具互不相干，又有正壓空氣防護(hù)，所以可把它們放在通常條件下。它們是手提式的，既便于維修，又能最大限度地利用房舍和設(shè)備。

使用此種方法是否成功，取決于管理工作的好壞。密切監(jiān)視房室的污染和人員流動(dòng)，只準(zhǔn)專(zhuān)職人員入室。應(yīng)當(dāng)在正壓、單向氣流條件下料理維修鼠籠，接觸小鼠的一切物品（飼料和其它物品）都必須滅菌。飲水須經(jīng)處理除去細(xì)菌，專(zhuān)職工作者須穿戴無(wú)菌的外科口罩、帽子、手套和后長(zhǎng)衣，觸及動(dòng)物時(shí)須用頭端包有橡皮的鑷子，而且必須經(jīng)變性乙醇（就放在一邊）的浸洗。

⑷空氣層流室。有別于上述的一個(gè)房間內(nèi)放置的小型空氣層流器，而是整個(gè)房間的環(huán)境都為正壓過(guò)濾空氣所籠罩。設(shè)計(jì)時(shí)，須裝置空氣進(jìn)入的開(kāi)關(guān)，空氣入口要裝指示器。工作人員在室內(nèi)的穿戴同上所述。室內(nèi)應(yīng)用的飼料、墊料和籠具的滅菌，須用兩端有開(kāi)關(guān)的高壓蒸氣滅菌器。

引種方法可最大限度地利用房舍以繁育動(dòng)物。雖然裝設(shè)此種房間的經(jīng)費(fèi)昂貴，但是，空氣層流室加上嚴(yán)格限制人員的出入，可保證生育期的裸體小鼠順利生產(chǎn)，它是大量繁殖裸小鼠的最好方式。舉例來(lái)說(shuō)，由于采用它，近五年來(lái)（1973～1977），在Frederick癌癥研究中心平均每年生產(chǎn)裸體小鼠在20,000以上。

2．環(huán)境控制

⑴溫度。適于裸體小鼠的室溫為26～28℃（78～820F），裸體小鼠無(wú)毛、其散失體溫較有毛小鼠為快。處于連續(xù)空氣層流中，它們的散熱更快，需要大約28℃（800F）的室溫予以補(bǔ)償。一般飼料室內(nèi)溫度控制在25℃±1℃也可以。如果裸鼠和有毛雜合子鼠同籠飼養(yǎng)時(shí)室溫可略低一點(diǎn)。飼料在在連續(xù)空氣層流室中的裸鼠需要將層流室內(nèi)溫度提高到28℃。

⑵濕度。相對(duì)溫度應(yīng)保持在40～60%，此時(shí)，成年裸體小鼠皮膚水分散失最少。濕度過(guò)低，對(duì)新生裸鼠生存不利，這在空氣層流環(huán)境中尤為重要。

⑶通風(fēng)。一般認(rèn)為，每小時(shí)需要通風(fēng)換氣10～15次，要用高效過(guò)濾器（99.9%）保證良好的空氣過(guò)濾，除盡空氣中大于0.3μm的顆粒?？諝獬隹谝灿羞^(guò)濾裝置（也可以用效能上較低的）以防止空氣倒流時(shí)的污染，而且要先設(shè)計(jì)好怎樣從室外維修這些過(guò)濾器。

在空氣層流室內(nèi)，空氣的正壓至少為0.65cmH2O?？諝獾牧飨蚝退俣纫刂频镁鶆蚨杂?。過(guò)濾的空氣連續(xù)掠過(guò)鼠籠時(shí)，奔流于動(dòng)物環(huán)境之中，在理論是一個(gè)防止外源性污染的屏障。

⑷光照。每日應(yīng)當(dāng)維持10小時(shí)光照，14小時(shí)無(wú)光的明暗周期。不用窗戶(hù)，用人工照明，使全年光照恒定，但應(yīng)避免過(guò)強(qiáng)的熒光燈光照。

3．籠具和墊料

培育裸體小鼠的籠具，籠底面積應(yīng)當(dāng)為97平方厘米（15平方吋），高度應(yīng)為12.7厘米（5吋），應(yīng)選可耐受高壓蒸氣滅菌的塑料或不銹鋼制作。其造型應(yīng)當(dāng)便于重疊，以利滅菌和存貯。透明塑料籠較好，用時(shí)不必打開(kāi)籠蓋就要觀察動(dòng)物。籠底要放墊料，不能用網(wǎng)。

籠子必須每周清潔一次，或視需要處理，以保證環(huán)境清潔、干燥。用去污劑或其它洗滌劑清洗后的籠子或其它物品，必須充分沖洗干凈。否則，會(huì)刺激裸體小鼠的皮膚。

墊料直接接觸裸體小鼠的皮膚，不能帶有刺激性?？蛇x用不帶塵土和尖塊的硬木屑，研磨過(guò)的玉米桿，或用松木刨花。用前都要滅菌，且滅菌后不結(jié)成塊狀才可使用。

為裸體小鼠建巢可用棉花或棉紙。但是，如果墊料有一吋厚，而且室溫控制得恰到好處，能使裸鼠感染舒適，一般就不需要墊棉花或棉紙了。

4．供食和供水

⑴飼喂。裸體小鼠的營(yíng)養(yǎng)需求與其它品系的小鼠相似。所以，任何市售飼料均可使用。食物必須滅菌，可將食物鋪成單層后放在小盤(pán)中或放在有孔的口袋中，進(jìn)行高壓蒸氣滅菌（45分鐘，120℃）。滅菌前，不耐熱的營(yíng)養(yǎng)素要加大用量（Williams氏等，1968）。另外，可補(bǔ)充全小麥面包和復(fù)制牛奶以改進(jìn)生育能力，并防止同類(lèi)噬食現(xiàn)象（Poiley氏等，1974）。

⑵飲水。有時(shí)，自來(lái)水中含有少量的各種非致病菌（包括銹色假單細(xì)胞菌）。為了避免經(jīng)水源而污染裸體小鼠種群，有人建議將飲水過(guò)氯化達(dá)到12～15ppm；或用鹽酸酸化飲水，使之pH達(dá)到2.5～2.8，都可有效地控制其污染率，特別是假單細(xì)胞菌屬細(xì)菌的污染。如由于高壓滅菌而過(guò)多地?fù)p失維生素則可在飲水中加入復(fù)合維生素（例如，每1000ml加入1ml各種維生素），將該混合液通過(guò)直徑0.2μm微孔薄膜過(guò)濾除菌，每平方吋的壓力不得超過(guò)10磅。維生素混合液及水應(yīng)適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行某些細(xì)菌培養(yǎng)的檢查，并應(yīng)隔天更換水瓶，水瓶和飲水管在兩次使用之間必須洗滌和消毒。

通過(guò)飲水供給抗菌素，可消除胃腸道的細(xì)菌（Van Der Waaij氏，1966）。并且，這也是一個(gè)防止裸體小鼠在嚴(yán)格的環(huán)境控制下可能發(fā)生的外源污染的附加措施。我們使用的四種配方如表4-4所示。下列抗菌素很少消化道吸收，每一種配方應(yīng)每周更換一次，每四周輪換一遍，可減少抗藥菌株的出現(xiàn)。

假如你一開(kāi)始就在嚴(yán)格控制的環(huán)境中繁育無(wú)菌裸體小鼠，則也可以不必使用抗菌素，因?yàn)榧佑每股睾笤诜庇夹g(shù)上出現(xiàn)差錯(cuò)的可能性也就增加了。

裸體小鼠飲水中所用抗菌素的種類(lèi)和用法

5．空氣層流室的保養(yǎng)

層流室內(nèi)從地面到天花板以及設(shè)備均需保持無(wú)塵和無(wú)破碎。每月必須檢測(cè)室內(nèi)的無(wú)菌情況，每平方米放一個(gè)平皿，檢查室內(nèi)空氣中的細(xì)菌數(shù)量。落下菌的檢查各國(guó)規(guī)定不同，見(jiàn)下表

表4－5 各國(guó)層流室落下菌限度的規(guī)定

除落下菌數(shù)目不得超過(guò)限度外，并且不能有致病菌存在，否則，需要重新消毒。

一切可移動(dòng)的設(shè)備最好高壓滅菌，不可移動(dòng)的裝置（如墻、地板、天花板等）要用液體酚類(lèi)消毒劑徹底清潔，消毒應(yīng)重復(fù)進(jìn)行三次。消毒后房間應(yīng)密封，48小時(shí)后作微生物學(xué)污染檢測(cè)，如檢測(cè)是陰性，才允許使用。工作人員入內(nèi)必須穿戴全套滅菌外科手術(shù)衣和消毒的長(zhǎng)靴。

（三）裸鼠生產(chǎn)

為了保證裸鼠具有相應(yīng)品系的遺傳純度和嚴(yán)格的微生物控制要求，應(yīng)根據(jù)裸鼠所具有特殊性，建立以下生產(chǎn)制度進(jìn)行生產(chǎn)。

1．核心群的動(dòng)物（GF）：按微生物學(xué)要求，應(yīng)是經(jīng)過(guò)無(wú)菌剖腹手術(shù)飼料在小型隔離器內(nèi)的無(wú)菌動(dòng)物。按遺傳學(xué)要求，一個(gè)隔離器內(nèi)的動(dòng)物應(yīng)是相應(yīng)的近交系，采用兄妹交配，一個(gè)隔離器是帶有nu純合基因的，采用回交和互交方法進(jìn)行維持。

2．?dāng)U大群動(dòng)物（GB）：按微生物學(xué)要求，應(yīng)是來(lái)自核心群的無(wú)菌的幼小裸鼠和雜合鼠，放入大隔離器內(nèi)或水平層流的小隔離房?jī)?nèi)，并對(duì)這些幼鼠導(dǎo)入復(fù)合的正常腸內(nèi)菌叢，使之變成悉生動(dòng)物。按遺傳學(xué)要求，應(yīng)保持nu等位基因的純合子和雜合子進(jìn)行生產(chǎn)。

3．生產(chǎn)群動(dòng)物的種子群，應(yīng)來(lái)自擴(kuò)大群的動(dòng)物，飼料在屏障系統(tǒng)內(nèi)，一個(gè)生產(chǎn)周期為6～20個(gè)月。

試驗(yàn)期裸鼠也應(yīng)以裸鼠的免疫功能缺陷特性，按以下體系進(jìn)行試驗(yàn)與飼料（見(jiàn)圖4-2）。

⑴裸鼠移植癌建立和檢疫。

⑵腫瘤維持。

⑶大量移植。

總之，應(yīng)按生產(chǎn)裸鼠所有的要求進(jìn)行，否則試驗(yàn)不易獲得成功。

飼料繁殖裸鼠必須注意的問(wèn)題：

⑴建立屏障系統(tǒng)是飼料繁殖裸鼠的重要條件。裸鼠先天性胸腺缺失，免疫系統(tǒng)不健全，缺乏對(duì)付外來(lái)因子的抵抗力，對(duì)病原體極易感染，在常規(guī)環(huán)境中，最多只能生存數(shù)月，因此，必須要在無(wú)病原隔離飼料環(huán)境中飼料。根據(jù)我國(guó)目前實(shí)際情況，尚不能新建更多的高標(biāo)準(zhǔn)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施，而改造現(xiàn)有建筑的辦法是可行的。改建后的屏障飼養(yǎng)室雖與科技發(fā)達(dá)國(guó)家相比是比較簡(jiǎn)陋的，但基本上達(dá)到了屏障系統(tǒng)設(shè)施的要求，費(fèi)用大為降低，也可使裸鼠繁殖工作正常進(jìn)行。

⑵裸鼠繁殖方法最好選用純合子隱性（nu/nu）雄鼠與雜合子（nu/+）雌鼠進(jìn)行交配生產(chǎn)。因?yàn)榧兒献与[性雄鼠一般能正常生育，其仔代裸鼠和正常仔鼠的比例為1：1；所有正常的仔鼠都是雜合子，當(dāng)用這些小鼠作實(shí)驗(yàn)對(duì)照時(shí)，就可明顯地觀察到純合子與雜合子之間的不同差異。裸鼠繁殖的其它二種方法，均存在一定缺點(diǎn)，如采用雜合子（nu/+）雌雄鼠交配時(shí)，其子代中裸鼠與表現(xiàn)型正常的仔鼠的比例為1：3，所繁殖的裸鼠少，而且繁殖的正常小鼠可能是nu/+或+/+兩種基因的小鼠，除非通過(guò)育種，否則不易區(qū)別。又如采用純合子隱性（nu/nu）雄鼠和雌鼠交配繁殖，雖然所有的子代都是裸鼠，但這種繁育方法不很有效，因?yàn)榇坡闶蠓敝沉Φ?，同時(shí)護(hù)理也很困難。

⑶仔鼠出生后存活與否，關(guān)鍵在于哺乳，如不注意哺乳則哺乳期裸鼠死亡率很高。主要原因在于同窩哺乳的有雜毛純合仔鼠發(fā)育快，體大健壯，競(jìng)爭(zhēng)力強(qiáng)，與純合裸鼠爭(zhēng)食母乳而影響純合裸鼠的發(fā)育，以致其消瘦死亡。為了提高裸鼠生長(zhǎng)發(fā)育速度及存活率，采用純合裸鼠，雜合仔鼠分別哺乳，并對(duì)雌鼠加喂高蛋白、高維生素飼料。

⑷為了保持較長(zhǎng)期的正常繁殖生長(zhǎng)，就必須建立微生物監(jiān)測(cè)方法來(lái)控制質(zhì)量。因裸鼠免疫機(jī)能的缺陷，易受微生物、病毒和寄生蟲(chóng)感染，特別是易受小鼠肝炎病毒的感染，一但裸鼠感染上小鼠肝炎，同窩裸鼠會(huì)于生后36～134天相繼死亡，無(wú)一幸免。病鼠肝發(fā)生大理石樣變化，質(zhì)較硬，呈黃色、粗造、結(jié)節(jié)樣、邊緣不齊。對(duì)裸鼠的飼料繁殖威脅很大。在裸鼠的飼料中，常易發(fā)生所謂“消耗性綜合征”（Wasting syndrome）實(shí)與裸鼠常見(jiàn)病之一的鼠病毒性肝炎感染有密切關(guān)系，用剖腹產(chǎn)可避免此病毒感染。

采用微生物的檢查方法時(shí)，要考慮裸鼠的生理特性，裸鼠屬于免疫機(jī)能缺陷的動(dòng)物，鼠肝炎病毒、仙臺(tái)病毒等感染后，血清中不產(chǎn)生抗體。因此，只能檢查同胎雜合仔鼠血清中的抗體情況，或直接分離病原體，或?qū)⒙闶蟮母谓M織接種于雜合仔鼠后，再用血清學(xué)方法測(cè)定其相應(yīng)抗體。因此，對(duì)裸鼠一些致病性的病毒和臺(tái)澤氏病原體等的檢查方法，主要是檢查同胎雜合鼠血清中抗體的產(chǎn)生情況，來(lái)判斷裸鼠是否被這些病原體所感染。